背景资料 

NBR1（自噬底物NBR1）参与受损细胞器、细胞内微生物、蛋白质聚集体、细胞结构和特定可溶性蛋白质的选择性自噬过程。NBR1作为自噬适配器介导这一过程。该蛋白有两个UBA结构域，但只有C末端的UBA结构区结合的泛素。可供选择的名称：At4g24690，假定的未表征蛋白F22K18.110。   

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NBR1 |自噬底物NBR1基本参数：

• 免疫原：拟南芥NBR1的UBA2结构域，与GST融合，UniProt:Q9SB64，TAIR:AT4G24690

• 宿主：兔子

• 克隆性：多克隆

• 纯度：血清

• 格式化：冻干

• 数量：50?l

• 重组：为重组添加50?l无菌水

• 储存：在-20°C条件下冷冻干燥/复原储存；一旦复原，就制作等分试样，以避免重复的冻融循环。请记得在打开管子之前先短暂旋转管子，以避免材料粘附在管子的盖子或侧面可能造成的任何损失。

• 测试应用：免疫定位（IL）、蛋白质印迹（WB）

• 推荐稀释度：1:1000（IL），1:500-1:5000（WB）

NBR1 |自噬底物NBR1应用示例：

用NuPAGE样品缓冲液（106 mM Tris-HCl pH 8.5，141 mM Tris-碱，2%十二烷基硫酸锂，0.51 mM EDTA pH 8.0，10%甘油，0.22 mM考马斯蓝G250，0.166 mM酚红）和50 mM二硫苏糖醇提取约8天龄拟南芥幼苗的总蛋白，并在100°C下变性5分钟。在Bolt 10%Bis-Tris Plus凝胶（Invitrogen）上通过电泳分离蛋白质，并使用半干转移在24V下转移40分钟到Amersham Protran 0.45?m硝化纤维膜（GE Healthcare Life Sciences）上。在4°C搅拌下，用TBS-T中的8%牛奶将膜封闭2小时。将膜在稀释度为1:4000的一级抗体中在4°C下孵育过夜，并在TBS-T中的8%牛奶中搅拌。倾析抗体溶液，并短暂冲洗印迹两次，然后在4°C的TBS-T中的8%牛奶中搅拌洗涤3次，持续5分钟。将膜在TBS-T中的8%牛奶中稀释至1:5000的第二抗体（马萝卜过氧化物酶缀合的山羊抗兔IgG）中在4°C下搅拌孵育4小时。将膜在4°C的TBS-T中搅拌洗涤3次，持续5分钟，并用WesternBright化学发光检测试剂（Advansta）孵育2分钟。暴露时间为30秒。   

部分引用文献：

• Selected references Rodriguez et al. (2020). Autophagy mediates temporary reprogramming and dedifferentiation in plant somatic cells. bioRxiv doi.org/10.1101/747410

• Calero-Mu???±oz et al. (2019). Cadmium induces reactive oxygen species-dependent pexophagy in Arabidopsis leaves. Plant Cell Environ. 2019 Sep;42(9):2696-2714. doi: 10.1111/pce.13597.

• Jia et al. (2019). Noncanonical ATG8-ABS3 interaction controls senescence in plants. Nat Plants. 2019 Feb;5(2):212-224. doi: 10.1038/s41477-018-0348-x.

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